如何利用液氮將菌種在-80℃低溫冷凍保藏

將菌種保藏在-80 ℃冰箱中以減緩細(xì)胞的生理活動(dòng)進(jìn)行冷凍的一種保藏方法。液氮罐廠家分享其操作步驟如下：

*先做好安瓿管的準(zhǔn)備

安瓿管材料以中性玻璃為宜。清洗安瓿管時(shí)，先用2%鹽酸浸泡過夜，自來水沖洗干凈后，用蒸餾水浸泡至pH中性，干燥后、貼上標(biāo)簽，標(biāo)上菌號(hào)及時(shí)間，加入脫脂棉塞后，121 ℃下高壓滅菌(15～20) min，備用。

其次要做好保護(hù)劑的選擇和準(zhǔn)備

保護(hù)劑種類要根據(jù)微生物類別選擇。配制保護(hù)劑時(shí)，應(yīng)注意其濃度及pH值，以及滅菌方法。如血清，可用過濾滅菌;牛奶要先脫脂，用離心方法去除上層油脂，一般在100 ℃間歇煮沸2～3次，每次(10～30) min，備用。

之后注重微生物保藏物的準(zhǔn)備

在*適宜的培養(yǎng)條件下將細(xì)胞培養(yǎng)至靜止期或成熟期，進(jìn)行純度檢查后與保護(hù)劑混合均勻，分裝。微生物培養(yǎng)物濃度以細(xì)胞或孢子不少于(108-1010)個(gè)/mL為宜(以大腸桿菌(Escherichia coli)為例，為了取得每毫升1010個(gè)活細(xì)胞菌液2 mL～2.5 mL，只需10 mL瓊脂斜面兩支)。

采用較長的毛細(xì)滴管，直接滴入安瓿管底部，注意不要濺污上部管壁，每管分裝量約(0.1～0.2) mL，若是球形安瓿管，裝量為半個(gè)球部。若是液體培養(yǎng)的微生物，應(yīng)離心去除培養(yǎng)基，然后將培養(yǎng)物與保護(hù)劑混勻，再分裝于安瓿管中。分裝安瓿管時(shí)間盡量要短，*好在(1～2) mL內(nèi)分裝完畢并預(yù)凍。分裝時(shí)應(yīng)注意在無菌條件下操作。

接著進(jìn)行凍結(jié)保藏

將安瓿管或塑料凍存管置于-80 ℃環(huán)境中保藏。

*后，咱們還得知道，冷藏后如果要取出使用的復(fù)蘇方法。從冰箱中取出安瓿管或塑料凍存管，應(yīng)立即放置38 ℃～40 ℃水浴中快速復(fù)蘇并適當(dāng)快速搖動(dòng)。直到內(nèi)部結(jié)冰全部溶解為止，約需50 s～100 s。開啟安瓿管或塑料凍存管，將內(nèi)容物移至適宜的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。